본 발명은 환자의 원 조직과 일치율이 높은 오가노이드를 제작할 수 있는 배양액의 조성 및 비율을 제공한다. 더욱 상세하게는 R-스폰딘 (R-spondin　3, RSpo3) 조절 배지 조성물, 상피 성장 인자(Epidermal growth factor, EGF), 뉴레귤린-1(Neuregulin-1; Nrg1), 염기성 섬유아세포성장인자 (basic fibroblast growth factor, FGFb), IGF-1(insulin-like growth factor-1) 및 CHIR99021를 유효 성분으로 포함하는 간 오가노이드 배양용 배지 조성물 및 이를 이용한 간 오가노이드의 제조 방법으로서, 본 발명에 따라 제작된 간 오가노이드는 세포 손상률이 낮고, 원 조직과 70% 이상의 일치율을 갖는다.