본 발명은 (a) 젤라틴(gelatin) 용액과 분리대두단백질(soy protein isolated, SPI) 용액을 각각 제조하는 단계; (b) 상기 젤라틴 용액과 분리대두단백질 용액을 혼합하여 젤라틴/분리대두단백질 혼합용액을 제조하는 단계; (c) 상기 젤라틴/분리대두단백질 혼합용액에 효소 가교제를 첨가하고 반응시켜 1차 가교물을 형성하는 단계; 및 (d) 상기 1차 가교물을 방향성 동결(directional freezing)하여 방향성 동결된 1차 가교물을 얻는 단계;를 포함하고, 상기 방향성 동결에 따라 일 방향으로 결이 정렬된 튜브 형 기공이 형성되는 것을 특징으로 하는 배양육용 근육모사 세포지지체의 제조방법이 제공된다. 이에 의하여 고기의 다양한 부위의 식감을 모사하는 배양육을 제조할 수 있고, 동물성 재료인 젤라틴 사용을 줄이고, 장기간 배양에 사용할 수 있다.